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[자연과학] 일반생물학 實驗 - mini preparation(plasmid DNA를 소량 분리하는 방법)實驗

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작성일 24-05-03 13:40

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Introduction
유전자 재조합은 DNA를 목적에 따라 적절히 자르고 붙여서 유전물질을 원하는 형태로 개조시키는 과정이다. 우리가 얻고자 하는 plasmid DNA는 상층액에 존재하게 된다

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다. SDS라는 detergent가 세포막을 녹여버리면서 안에 있던 세포 내용물이 용액으로 흘러나오게 된다 이 때 바로 alkaline 용액에 노출된 DNA는 denature된다 그러나 크기가 작은 supercolied plasmid DNA는 잘 denature되지 않는다. 이 때 plasmid DNA분리에 사용되는 preparation(of plasmid DNA) 방법은 많은 후보를 빠른 시간에 analysis(분석) 하는데 유용하게 사용되어진다.

실험과제/생물의학

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설명

[자연과학] 일반생물학 實驗 - mini preparation(plasmid DNA를 소량 분리하는 방법)實驗
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Title : Mini Preparation
Objective : DNA의 크기차이에 의해 분리하는 방법인 alkaline lysis method를 이용하여 정제된 DNA의 양을 불린다. 이 때 원하는 DNA분자가 만들어졌는지를 조사하기 위하여 형질전환체 중 여러 colony를 후보로서 택하여 형질전환체 내에 들어있는 plasmid DNA를 조사하여야한다. 때로는 lysozyme을 쓰기도 한다.
주로 mini preparation(mini prep.)이라고 부르는 이 방법은 plasmid DNA를…(생략(省略))

1. 세포벽을 깬다.

2. 세포막을 조심스럽게 깨서 크기가 큰 chromosomal DNA가 너무 잘게 조각나는 것을 방지하면서 용액에 DNA를 노출시킨다. 즉, 제한효소를 사용하여 목적 DNA와 plasmid DNA를 잘라 이 두 분자를 ligase를 사용하여 연결시키는 것이다.

3. pH를 급격하게 7.0까지 복구시키면 크기가 작고 supercoiled form을 유지하고 있던 plasmid는 비교적 renaturation이 잘 되지만 chromosomal DNA는 renature되지 못하고 엉기게 된다 이렇게 엉긴 chromosomal DNA를 원심분리로 제거한다. 세포벽을 군데군데 무너뜨리는 물질은 EDTA이며, 이 때 sucrose나 glucose가 첨가되어 세포의 형태를 유지하도록 한다. 이 때 세포막은 유지되도록 한다. 이렇게 반응시킨 DNA용액을 대장균에 형질전환 시킨다. 가장 기본적인 DNA조작기법인 재조합DNA(recombination DNA) 기술은 필요로 하는 외부 DNA단편을 vector라고 부르는 운반자 plasmid DNA분자에 연결시켜 목적으로 하는 DNA부분만 증폭시킬 수 있는 새로운 재조합 DNA를 만드는 것이다.

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1. 세포벽을 깬다.

2. 세포막을 조심스럽게 깨서 크기가 큰 chromosomal DNA가 너무 잘게 조각나는 것을 방지하면서 용액에 DNA를 노출시킨다. 즉, 제한효소를 사용하여 목적 DNA와 plasmid DNA를 잘라 이 두 분자를 ligase를 사용하여 연결시키는 것이다.

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