영양생화학 실험 - SDS-PAGE에 의한 단백질 분리와 Western Blotting
페이지 정보
작성일 23-04-15 06:39
본문
Download : 영양생화학 실험 - SDS-PAGE에.hwp
항체에 대한 단백질의 결합은 특이적이므로 강하게 붙어 있는다. 이를 보기 위해서 2차 항체를 결합시킨 후 발광시약을 넣어 2차 항체를 발색시켜 단백질을 확인한다.
먼저 NC종이로 옮겨진 단백질이 더 이상 비특이적으로 결합하지 않게 하기위해서 blocking 한 후 특정 단백질에 대한 항체인 1차 항체를 결합시킨다.
SDS-PAGE로 단백질을 분리한 후 전기영동을 통해 단백질의 분자량을 측정(測定) , 단백질항체이용 analysis(분석) 을 할 수 있따
단백질을 비특이적으로 결합하는 nitrocellulose paper의 特性을 이용하여 SDS-PAGE 방법으로 분리된 단백질을 NC종이로 전기이동 시킨 다음 특정 단백질에 대한 항체를 이용하여 그 특정 단백질의 존재 여부, 위치, 양 등을 확인할 수 있다.
SDS-PAGE에 의한 단백질 분리와 Western Blotting SDS-PAGE로 단백질을 분리한 후 전기영동을 통해 단백질의 분자량을 측정, 단백질항체이용 분석을 할 수 있다. 따라서 아크릴아미드 겔은 분자를 질량에만 의존하는 분리가 가능하다.
표적 단백질에 대한 항체를 이용하여 항원-항체 반응으로 그 단백질을 확인하는 방법.
2. SDS-PAGE에 의한 단백질 분리의 원리
3. Western blot의 원리
영양생화학 실험 - SDS-PAGE에 의한 단백질 분리와 Western Blotting
영양생화학 실험,SDS-PAGE,단백질 분리,Western Blotting
단백질을 비특이적으로 결합하는 nitrocellulose paper의 特性을 이용하여 SDS-PAGE 방법으로 분리된 단백질을 NC종이로 전기이동 시킨 다음 특정 단백질에 대한 항체를 이용하여 그 특정 단백질의 존재 여부, 위치, 양 등을 확인할 수 있다. pipette, 마이크로 피펫, e.p 튜브, 팁, 볼텍스기, SDS-gel, Vertical slab gel unit, comb, n-butanol, methanol, 3MM paper, blocking buffer, Ponceau, skim milk, 전기영동기, transfer장치, nitrocellulous paper, 스펀지, fillter paper, shaker, ECL 시약, flim, 랩, 알코올
설명
순서
먼저 NC종이로 옮겨진 단백질이 더 이상 비특이적으로 결합하지 않게 하기위해서 blocking 한 후 특정 단백질에 대한 항체인 1차 항체를 결합시킨다. 그리하여 전기장에서 질량만 가지고도 이동시킬 수 있게 된다. 이 때 이동하는 속도는 입자의 전하량, 크기와 모양, 용액의 pH와 점성도, 용액에 있는 다른 전해질의 농도와 이온의 세기, 지지체의 종류 등 여러 가지 요인에 의해 결정된다. 항체에 대한 단백질의 결합은 특이적이므로 강하게 붙어 있는다.
레포트 > 의학계열
Download : 영양생화학 실험 - SDS-PAGE에.hwp( 78 )
SDS-PAGE는 폴리아크릴아미드 겔의 그물조직을 지지체로 사용한다.
pipette, 마이크로 피펫, e.p 튜브, 팁, 볼텍스기, SDS-gel, Vertical slab gel unit, comb, n-butanol, methanol, 3MM paper, blocking buffer, Ponceau, skim milk, 전기영동기, transfer장치, nitrocellulous paper, 스펀지, fillter paper, shaker, ECL 시약, flim, 랩, 알코올
이 때 아크릴아미드 겔을 사용하는데 서로 다른 그물조직을 가진 두 가지 아크릴아미드 겔을 포개어 층을 이루게 하고 지지체의 그물조직의 구멍의 크기는 아크릴아미드의 농도를 alteration(변화) 시킴으로써 임의로 바꿀 수가 있다.
1. 전기영동의 원리
전기영동은 전기장을 이용하여 입자를 양극 또는 음극쪽으로 이동시키는 현상을 말한다.
SDS-PAGE에 의한 단백질 분리와 Western Blotting
다. 이를 보기 위해서 2차 항체를 결합시킨 후 발광시약을 넣어 2차 항체를 발색시켜 단백질을 확인한다. 또한 SDS가 단백질의 구조를 파괴하게 되면서 모든 단백질에 대해 SDS가 결합하게 되면서 전하가 일정하게 된다. 예를들어 상층은 덜 촘촘한 겔이어서 단백질을 농축하는 역할을 한다.
